1926年他在上海与田汉合作，创办南国电影剧社，参加了未完成的影片《到民间去》的拍摄，演出了《苏州夜话》、《名优之死》等话剧。他是南国社的主要骨干。1929年初，应广东戏剧研究所所长欧阳予倩之邀，到广州任该所的剧务主任和该所附设的戏剧学校教务主任。1933年冬，在既无资金又不愿让官方作后台的情况下，他全凭自己的热情和勇气，以及话剧界朋友们的支持，赤手空拳在上海创办了中国旅行剧团。当时，中国人民正遭受着军阀混战和帝国主义侵略的无穷苦难，话剧作为西洋艺术被介绍到中国来，能够欣赏的观众并不多。他不计成败得失，偕同妻子关静、女儿唐若青投入了这个开始仅几个成员的小剧团。经过惨淡经营和伙伴们的共同奋斗，“中旅剧团”这个纯粹的民间职业话剧团走南闯北，踪迹遍及平、津、沪、宁、汉和香港等地，努力支撑了14年之久，终于闯出了一条路，扩大了话剧的影响，推动了话剧的职业化。他导演、主演的许多重要剧目，在艺术上形成了自己的风格。他培养了大批话剧人才，如舒绣文、蓝马、白杨、陶金、孙道临等人。著名话剧演员孙景璐曾说：“我是唐槐秋先生指引下开始了艺术生涯的。”
《桃李劫》
他和电影界的关系密切。1933年2月，中国电影文化协会在上海成立，他当选为执行委员。在《都会的早晨》、《失恋》、《桃李劫》、《大地之花》、《孔夫子》、《洪宣娇》、《大雷雨》等影片中，他均演过主要角色。
抗日战争期间，由于他在沦陷区组织演出进步剧目，在北平和上海两次被日军投入监狱，身体备受摧残，他不怕利诱威逼，表现了一个爱国者的崇高气节。田汉赞扬他“开荒播种三千里，茹苦含辛二十年”，“矢傲满身犹战斗，湖南端的出蛮牛”。
全国解放后，他在北京中国戏曲研究所任导演科长，参加过《兵符记》的导演。1954年4月25日逝世，终年56岁。
1984年11月，中国戏剧家协会为纪念中国旅行剧团成立50周年暨著名戏剧家唐槐秋逝世30周年，专门召开了纪念会。阳翰笙、曹禺在发言中都称他是“中国话剧事业的开拓者”。
1927年先后游历了瑞士及意大利的米兰、佛罗伦萨、罗马等地，观赏到众多名家画作。5月，法国国家美术展览会展出其作品9件。秋，抵达上海，任国立第四中山大学（后改称中央大学）艺术系教授。
1928年1月，与田汉、欧阳予倩组织“南国社”。在上海成立南国艺术学院，担任绘画科主任。2月，应南京中央大学的聘请任艺术系教授。10月，任北平大学艺术学院院长，年底辞职。
1929年专职在南京中央大学任教。在第一届全国美术展览会《美展汇刊》上连续发表《惑》、《惑之不解》等文章，批判了欧洲美术界的现代形式主义艺术流派及其对中国的影响。提倡绘画的写实性、创新性。
1930年完成油画《田横五百士》。夏，在江西南昌走访民间木雕艺人范振华。
1931年春，在比利时首都布鲁塞尔举办个人画展。完成《九方皋》第七稿。